Препараты неразведенного эякулята

Препараты неразведенного эякулята исследуют под световым микроскопом для выявления сперматозоидов, имеющих морфологические отклонения. Наиболее часто с этой целью пользуются методом раздавленной капли. Небольшую каплю свежей неразведенной спермы помещают на предметное стекло и покрывают большим покровным стеклом. В результате сперма растекается между двумя стеклами в виде тонкой пленки, что дает возможность изучить структуру находящихся в ней сперматозоидов без проведения специальной окраски. Такой анализ лучше всего проводить с помощью фазово-контрастного микроскопа. Можно также изучать морфологию сперматозоидов в мазках эякулята, которые готовят подобно мазкам крови. Мазки подсушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают. Для их окраски применяют разные красители. В большинстве ветеринарных лабораторий часто с этой целью пользуются ускоренным трехэтапным методом Гимза-Райта. Для его проведения можно воспользоваться готовыми красителями Harleco Hemacolor Это быстрый, простой и эффективный метод окраски. Однако он не позволяет окрашивать акросомальную часть сперматозоидов. Такие красители как тушь и эозин-нигрозин хорошо прокрашивают фон мазка, а не клетки. Это делает контуры сперматозоидов значительно более отчетливыми, чем при непосредственной их окраске. При окраске эозин-нигрозином на теплом предметном стекле осторожно смешивают по 1 капле рабочего раствора красителя и спермы. Из полученной смеси готовят мазок, который подсушивают на воздухе, фиксируют и микроско — иируют. Краситель Spermac (Fertility Technologies Inc, США) обеспечивает отличную дифференциальную окраску сперматозоидов. При этом их ядра окрашиваются в красный цвет, а акросома, средняя часть и хвост становятся зелеными, причем экваториальная часть акросомы окрашивается наиболее слабо (Oettle, 1995). Этот метод может быть применен для окрашивания разведенной спермы, поскольку на его результаты не влияет наличие в составе разбавителей яичного желтка, сыворотки крови или молока. Окраска этим красителем не позволяет дифференцировать лейкоциты. Kustritz и соавторы (1998) показали, что соотношение сперматозоидов с нормальной и патологической морфологией в препаратах, приготовленных из одних и тех же проб спермы, может меняться в зависимости от использованных методов окраски. Это позволяет предположить, что в процессе окрашивания мазков могут происходить изменения морфологии сперматозоидов.